α-L- 阿拉伯呋喃糖苷酶在毕赤酵母中的表达及其对大麦麦芽 过滤性能的影响

摘要 通过PCR技术从黑曲霉（Aspergillus niger）基因组扩增获得一个全长1790 bp的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因，基因含有一个50 bp的内含子序列，其对应的蛋白质序列含有5个O糖基化位点和9个N糖基化位点，N端含有18个氨基酸的信号肽序列。将目的基因与表达载体pPICZαA连接并在毕赤酵母X-33诱导表达，获得重组α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶。重组酶的相对分子质量为70 kDa，最适反应pH和温度分别为5.5和50 ℃；金属离子 Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶的酶活有抑制作用，Fe3+对重组酶的酶活有促进作用；以4-Nitrophenyl α-L-arabinofuranoside为底物测得酶的Km值和Vmax值分别为0.78 mM和2.57 μmol/min/mg。在大麦麦芽协定糖化的初始阶段添加31.2 mU/g重组酶，麦汁的过滤速度提高了12.8%。以大麦麦芽阿拉伯木聚糖为底物，α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶与木聚糖酶有较好的协同作用