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ISSN: 2333-9721
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-  2019 

毕赤酵母表达的嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶N-糖基化修饰的作用与功能

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180042

Keywords: 嗜热蓝状菌 β-葡萄糖苷酶 N-糖基化 热稳定性 催化效率

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Abstract:

[目的]研究N-糖基化对来源于嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,Bgl3A)的酶学性质影响。[方法]采用定点突变技术构建了3个去N-糖基化的突变体T44A、S228A、S299A,并分别在毕赤酵母GS115中表达纯化。[结果]与野生型Bgl3A相比,突变体S228A分泌蛋白产量极低,仅能微量检测到pNPG活性;突变体T44A和S299A的最适pH和最适温度没有改变,分别为4.0和75℃,但二者的Tm值和70℃下的热稳定性都明显优于野生型。以pNPG为底物时,突变体S299A和T44A的催化效率分别降低了14.5%和70.0%;以纤维二糖为底物时,T44A的催化效率基本不变,而S299A的催化效率提高了1.1倍。[结论]Bgl3A不同位点的N-糖基化修饰对酶的分泌和酶学性质的影响具有明显差异。其中,N226位的N-糖基化在维持酶的表达和功能方面至关重要,而去除N297位点的N-糖基化可以提高酶的热稳定性及对纤维二糖的催化效率

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