毕赤酵母中tRNAPro CCG基因的表达及其作用效果

转运核糖核酸 (tRNA) 是蛋白质合成过程中重要参与成分之一，为了探索稀有密码子对应的tRNA (稀少tRNA) 丰度改变对外源基因表达量的影响，文中构建了毕赤酵母稀少tRNA基因与外源基因共表达体系。首先在GFP基因中添加由4个连续脯氨酸稀有密码子CCG组成的阻遏区，结果显示该GFP基因的表达量明显降低。然后将带有阻遏区的GFP基因和tRNAPro CCG基因顺次连接于pPIC9K载体上，在毕赤酵母GS115中共表达，结果使GFP表达量提高了4.9%；另将带有阻遏区的GFP基因和tRNAPro CCG基因分别连接于pPIC9K和pFLDα载体，在毕赤酵母GS115中共表达，GFP表达量最高提高了12.5%；应用同样方式将tRNAPro CCG基因与NFATc3T-GFP融合基因共表达，其表达量提高了21.3%。可见，tRNAPro CCG在毕赤酵母GS115中确为稀少tRNA，通过共表达tRNAPro CCG基因可显著提高带有连续该密码子的外源基因表达量，并且，文中构建的共表达体系将同样适用于其他稀少tRNA基因的筛选和验证