干酪乳杆菌胞外多糖基因簇的调控基因在大肠杆菌中异源表达

摘要 为研究干酪乳杆菌胞外多糖的生物合成和转录调控,对其生物合成基因簇中假定的转录调控因子LC2W_2170进行克隆,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达.首先,利用PCR技术从干酪乳杆菌LC2W中扩增出目的基因LC2W_2170,将其插入到大肠杆菌表达载体pET24a和pET30a中,构建出LC2W_ 2170 N端或C端和N端均含有His蛋白标签的重组质粒.含上述质粒的E.coli经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析并未发现LC2 W_2170蛋白可溶性表达.对LC2W_2170氨基酸序列利用Phobius服务器分析,发现该蛋白N端存在跨膜区(前27个氨基酸为跨膜序列).切除此跨膜区域重新构建重组表达质粒后,在E coli中成功实现LC2W_2170蛋白可溶性表达.研究为进一步纯化该转录调控因子,并研究其功能和对胞外多糖生物合成基因簇的转录调控机制奠定了基础