来源于胞曲霉的α-1,2-甘露糖苷酶在酿酒酵母△alg3△och1△mnn1菌株中的定位表达

摘要 利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)生产医药糖蛋白,必须对其N-糖基化途径进行人源化改造.在敲除酿酒酵母W303A特异性糖基化基因ALG3、OCH1和MNN1后,表达来源于胞曲霉(Aspergillus saitoi)的α-1,2-甘露糖苷酶(MsdSp)进一步改造酿酒酵母N-糖链.通过在MsdSp的C-端添加内质网滞留信号(HDEL)和构建高尔基体滞留信号Kre2p与MsdSp的嵌合体蛋白实现MsdSp在内质网和高尔基体中的定位表达.结果表明,各突变株中均检测到Man3GlcNAc2和Man4 GlcNAc2型N-糖链,并且在强启动子酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GPD)控制下,内质网定位表达MsdSp的菌株KM201中,Man3 GlcNAc2和Man4GlcNAc2型N-糖链含量较多.该研究为酿酒酵母N-聚糖进一步人源化改造提供依据