基于实时荧光定量PCR检测的沙门氏菌标准物质验证

摘要 该研究拟采用沙门氏菌核酸标准物质验证实时荧光定量PCR检测沙门氏菌,并对沙门氏菌核酸标准物质的适用性、均匀性、稳定性进行考察。使用不同的PCR仪进行检测比较,建立不同的PCR酶体系,并在沙门氏菌核酸标准物质中添加保护剂,以此来验证沙门氏菌核酸标准物质的适用性;同时根据线性图、参数表对沙门氏菌核酸标准物质进行均匀性、短期稳定性和反复冻融稳定性分析。结果表明研究设计的荧光定量PCR方法辅以标准物质具有良好的种属特异性,适用于常见的PCR仪和不同的酶体系,保护剂不影响沙门氏菌核酸的荧光扩增。研制的沙门氏菌标准物质样品均匀,未稀释的沙门氏菌核酸检测样在实验中6 d内量值保持稳定,反复冻融10次后的量值也相对稳定,溶解于保护剂的低浓度沙门氏菌核酸检测样稳定性加强,但低浓度沙门氏菌核酸检测样短期稳定性及反复冻融实验量值不稳定。辅以标准物质的实时荧光定量PCR技术检测准确度高且稳定,可用来验证各实验室的检测能力,实现微生物核酸检测技术的快速、准确、可溯源