基于土壤宏基因组文库筛选非培养木聚糖酶基因

摘要 采用物理化学法提取土壤基因组DNA,将土壤DNA纯化后采用序列筛选策略获得非微生物纯培养方式的木聚糖酶基因.序列筛选依据木聚糖酶保守序列设计简并引物,PCR扩增获得200 bp的木聚糖酶核心序列,构建了约5 000个克隆子的序列文库.随机挑取200个克隆子测序,获得11条来自未培养微生物的木聚糖酶核心序列.并对其中细菌源序列1～ 19进行研究,利用HiTAIL-PCR扩增细菌源序列1～19的木聚糖酶基因全长,分析其编码蛋白,并将其与表达载体pET-28a(+)连接后导入E.coli表达,超声破壁后测得木聚糖酶酶活力为(19.94±0.3) U/mL.利用序列筛选获取土壤宏基因组源木聚糖酶基因的研究为筛选获得土壤未培养微生物木聚糖酶基因新资源提供了新的途径