极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌中的高效表达

摘要 海栖热袍菌Thermotoga maritima为嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的极耐热性木聚糖酶B具有非常可观的工业应用前景.但编码该酶的基因xynB在大肠杆菌中的表达较困难.文中利用PCR技术将xynB克隆至原核表达载体pET-20b,并与组氨酸标签进行融合构建成重组质粒pET-20-xynB.研究发现,pET-20-xynB在稀有密码子AGA,AGG和AUA得到加强的大肠杆菌宿主菌株BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中,木聚糖酶基因的表达水平远远高于在其他菌株中的表达.结合对重组菌的诱导条件的优化,使得重组蛋白表达量达到11.5%,比酶活达到25.69U/mg,比常规基因工程菌株提高12.5倍