圆弧青霉BD26碱性脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以圆弧青霉BD26总RNA为模板,扩增出774 bp cDNA片段,将该基因片段克隆到表达载体pET-28a(+)上并转化Escherichia coil BL21(DE3),得到重组菌株BL21/Lip PD.经IPTG诱导,菌体在固体琼脂显色平板上形成明显透明圈.SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子质量约为27 ku.表达条件优化结果表明,当工程菌培养至OD600为0.5时,加入IPTG至终浓度为1.0mmol/L,在32℃诱导培养1 h,比酶活达29.30 U/mg