引入盐桥改善木聚糖酶AoXyn11A的温度特性

摘要 为改善米曲霉(Aspergillus oryzae CICC40186)木聚糖酶AoXyn 11A的温度特性,基于其与同一糖苷水解酶家族耐热木聚糖酶EvXyn11Ts一级和三维结构的比对和分析,在AoXyn11A N端空间区域引入3对盐桥.采用大引物PCR技术对野生型木聚糖酶基因(Aoxyn11A)实施定点突变,构建突变酶AoXyn1 1As基因(Aoxyn1 1As).分别将Aoxyn11A和Aoxyn11As在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中进行表达.酶学性质分析显示:AoXyn1 1As的最适温度(Topt)为58 ℃,较AoXyn1 1A提高了8℃;突变酶在50℃的半衰期(t1/2)为60 min,较原酶延长了1倍多,其在55和60℃完全丧失酶活性的时间分别由原酶的15和4 min延长至35和15 min;而突变酶的pH特性和动力学常数较原酶改变不大.在AoXyn11A N端空间区域引入盐桥增加了其三维结构的刚性,从而明显改善了其温度特性