重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达

摘要 利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcinB衍生肽LFcinB-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4 DNA连接酶连接到分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组表达载体pPIC9K-LFcinB-W 4,10经线性化后电转入毕赤酵母GS115中,经过G418浓度梯度筛选得到高拷贝转化子。经PCR鉴定,目的基因与酵母基因组稳定整合。阳性转化子经体积分数为2.5%的甲醇诱导表达,表达产物用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3.2 kDa的衍生肽LFcinB-W4,10。每24 h取样检测发酵上清液抑菌活性,结果表明,抗菌肽LFcinB-W4,10对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,诱导表达96 h时其抑菌圈直径最大。实验为探究牛乳铁蛋白肽功能-结构关系奠定了基础