耐酸性高温α-淀粉酶突变基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

摘要 利用表达载体pET-30a,实现了去信号肽的耐酸性高温α淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温α-淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.经多步纯化,重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312.7U/mg蛋白和354.6U/mg蛋白,纯化倍数分别为75.90和83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMY及AMYD酶分子质量均为63.5ku.重组酶AMY的最适温度80℃,最适反应pH为6.5,在温度低于90℃,反应pH5.5～7时,酶活较稳定.重组酶AMYD的最适温度80℃,最适反应pH为4.5,在温度低于90℃,反应pH4.0～6.5时,酶活较稳定