一种密码子优化的酸性普鲁兰酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

摘要 根据毕赤酵母密码子偏好性对来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶基因进行优化并构建在细胞内表达普鲁兰酶的重组毕赤酵母.优化后普鲁兰酶编码基因BdP4在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达水平平均比优化前的普鲁兰酶基因BdP提高4倍以上.筛选到1株表达水平较高的重组菌Pichia pastoris GS115/pPIC9K-BdP4 WB54.在5L发酵罐获得了初步优化的发酵条件:发酵液pH4.5,在菌体量达到87 g/L时开始甲醇流加,采用溶氧(D0)恒定策略控制甲醇流加,DO控制在25％的水平,甲醇流加速率为9.9 mL/(L· h),搅拌转速控制在最大值800 r/min,通风量2 V/(v·m).在优化条件下重组菌发酵酶活在2 000 U/mL以上.重组酶最适pH为4.0,最适作用温度50℃,在50和55℃下酶活半衰期分别为32和18h