“一锅法”生物转化富马酸制备L-天冬酰胺

摘要 L-天冬酰胺广泛应用于食品、医药、化工合成和微生物培养等领域.目前工业上主要依靠化学合成和直接提取方法制备.该研究首次采用双酶催化富马酸“一锅法”制备L-天冬酰胺.克隆来源于大肠埃希氏菌JM109的天冬酰胺合成酶A基因asnA,并于产L-天冬氨酸酶的E.coli CICC 11022S中表达,表达的蛋白分子质量约为37 kDa,与预期大小相符,比酶活力为1443.7 U/g.利用构建的工程菌E.coli CICC 11022S/pET28a(+)-asnA全细胞高密度催化富马酸生产L-天冬酰胺,以高效液相色谱法及PITC柱前衍生-高效液相法检测底物、中间产物和终产物,转化10 h,富马酸转化率为94.7％,L-天冬酰胺产量可达125.lg/L,生产速率为12.51 g/(L·h)