整合过表达嘌呤代谢途径关键酶基因提高酿酒酵母菌株环磷酸腺苷产量

摘要 调控嘌呤代谢途径关键酶基因表达水平,会影响经AMP→ ADP→ ATP而生成的cAMP(cyclic adenosine mnophosphate,cAMP)产量.将酿酒酵母编码磷酸核糖焦磷酸合成酶基因PRS1和PRS3、磷酸核糖焦磷酸氨基转移酶基因ADE4、腺苷酸激酶基因ADK1,分别置于磷酸甘油酸激酶基因PGK1的启动子PGK1p和终止子PGK1t控制下,利用整合载体YIplac211,在菌株GA125中进行整合表达,通过摇瓶实验考察所得菌株的环磷酸腺苷产量.结果表明,在加腺嘌呤条件下,120 h时的cAMP产量分别为(5 380.5±1.91)、(5 189.4±1.72)、(5 131.8±2.05)和(5 199.9±1.62) μmol/L,较菌株GA125分别提高9.8％、5.9％、4.8％和6.2％;此外,ADK1过表达导致一定的生长抑制,所有菌株的腺嘌呤消耗量在(0.399±0.01)～(0.447±0.02) g/L,葡萄糖利用和乙醇产生上彼此没有呈现明显差异