黑曲霉内切β-1,3(4)-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特性分析

摘要 基于黑曲霉CBS 513.88的基因组信息,以黑曲霉CICIM F0510为出发菌株,提取其总RNA,反转录得到cDNA,成功将其3个内切β-1,3(4)-葡聚糖酶的基因(en3gA、en3gB、en3gC)在毕赤酵母中进行了克隆与表达.获得了3个重组菌GS115(pPIC-en3gA)、GS115(pPIC-en3gB)和GS115 (pPIC-en3gC).在摇瓶水平上,这株重组菌的酶活分别为1.3、8.5和10.1 U/mL.重组酶En3 gA、En3 gB和En3gC的最适作用温度分别为65、50和55.C;最适作用pH分别为5.0、5.0和3.5.此外,3种重组酶对羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcellulose,CMC-Na)和凝结多糖都具有典型的内切水解作用.这3个重组β-1,3(4)-葡聚糖酶具有良好的温度和pH稳定性,可为其在啤酒制造以及饲料加工过程中的应用奠定基础