代谢工程改造Corynebacterium glutamicum生产L-苹果酸

摘要 以提高L-苹果酸的产量为目标,采用一次交换两次同源重组的方法,利用反向筛选标记,在敲除了丙酮酸醌氧化还原酶编码基因(pqo),丙酮酸脱氢酶编码基因(pdh)和乳酸脱氢酶编码基因(lldh)的C.glutamicum△pqo△pdh△lldh(C.glutamicum△PPL)基础上,无痕敲除了L-苹果酸积累支流代谢途径的2个关键酶基因:苹果酸醌氧化还原酶编码基因(mqo)和苹果酸酶编码基因(male),同时敲入了苹果酸分泌转运蛋白基因(transb),获得了产L-苹果酸的工程菌株;采用高效液相色谱法检测了工程菌株C.glutamicumAPPLAmqo::transbAmale的发酵产物.实验结果表明:C.glutamicum ATCC 13032发酵后不积累L-苹果酸,而工程菌C.glutamicum△PPL△mqo::transb △male发酵48h,积累了12.8 g/L的L-苹果酸,工程菌的糖酸转化率为33.18％,为利用C.glutamicum ATCC 13032发酵生产L-苹果酸提供了基础遗传资源