食品级高产亮氨酸氨肽酶重组Bacillus subtilis的构建和发酵优化

摘要 为解决枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在发酵产亮氨酸氨肽酶(leucine aminopeptidase,LAP)需额外添加抗生素的问题,该研究构建了1株食品级产LAP重组B. subtilis。首先通过Cre/lox系统敲除B. subtilis 168基因组中D-丙氨酸消旋酶基因(dal)得到缺陷型菌株BS168 (dal)-。其次使用高斯组装的方法构建以dal作为标记基因的质粒pMA5-lap-dal (AmpR, Ori)-并转化至BS168 (dal)-中得到食品级重组菌BS168 (dal)-/pMA5-lap-dal (AmpR, Ori)-。该工程菌发酵产LAP无需添加抗生素且不含抗性基因。对该菌株进行5 L发酵罐条件优化,在转速300 r/min、温度33 ℃、pH 7.0、分阶段补料的条件下,酶活最高达到302 U/mL。结果表明,构建的食品级重组B. subtilis产LAP具有潜在的工业应用前景