非甲醇诱导重组毕赤酵母表达木聚糖酶的条件优化

摘要 毕赤酵母是一种著名的外源蛋白表达宿主。但是甲醇作为诱导剂具有毒性以及在工业上大量应用易爆炸的危险性。所以研究非甲醇诱导剂诱导毕赤酵母是研究的热点。本研究以一株表达木聚糖酶的重组毕赤酵母为试材，首先优化了甲醇诱导的培养条件，进而采用甲酸铵作为诱导剂，联合山梨醇或者甲醇诱导重组毕赤酵母表达木聚糖酶。结果表明甲醇诱导时木聚糖酶活力最高达到3 403.8U/mL，单位细胞浓度活力为97.5 U/mL OD600。甲酸铵诱导毕赤酵母醇氧化酶1启动子的强度为甲醇诱导时的40.9%。联合0.5%甲酸铵和0.5%山梨醇时木聚糖酶活力为2 032.0 U/mL，单位细胞浓度的木聚糖酶活力为甲醇诱导时的1.54倍。这表明甲酸铵可以作为非甲醇诱导剂诱导毕赤酵母表达外源蛋白，并且联合山梨醇可以使重组毕赤酵母高效表达外源蛋白