发菜盐胁迫响应蛋白TrkA-N的克隆及在大肠杆菌中表达

摘要 前期通过高通量转录组测序对不同浓度盐胁迫下发菜的差异表达基因进行了分析,结果发现钾离子通道蛋白TrkA-N在 0.3 mol/L盐浓度下转录水平比无盐时明显下调。为更好研究该基因及其编码蛋白,通过分子生物学手段、以发菜基因组为模板,克隆钾通道蛋白编码基因TrkA-N序列,成功获得长度为696 bp的核酸序列。进行生物学信息分析结果表明,钾离子通道蛋白TrkA-N平均分子质量为31.41 kDa,理论等电点为5.82,该蛋白不含跨膜区,是亲水性蛋白。蛋白氨基酸序列中分别有10个Ser位点、6个Thr位点、2个Tyr位点,二级结构主要为α螺旋和β折叠。随后,将TrkA-N编码基因与诱导表达质粒pET28a进行重组并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,最佳表达条件为培养10 h后待菌液OD600值达到0.8时,添加终浓度为1 mmol/L 的诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG),继续诱导20 h,最终在大肠杆菌中成功表达出分子质量为31.41 kDa的蛋白。该研究为进一步阐明发菜响应盐胁迫的机制奠定一定的理论基础