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ISSN: 2333-9721
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-  2015 

一种检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.012

Keywords: 线粒体核酸酶,转基因细胞株,靶向修饰,CRISPR/Cas9,实时荧光定量PCR

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Abstract:

摘要 旨在建立一种简便检测线粒体DNA(mtDNA)核酸酶靶向剪切活性的方法。利用转基因技术,将一段含有两个靶向目标序列(T1、T2)的线粒体DNA序列随机整合到宿主基因组中,通过实时荧光定量PCR筛选单拷贝或低拷贝的单克隆转基因细胞株。将含有T1、T2的CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9质粒分别瞬时转染到所选细胞株中,靶向剪切核基因组,在靶向目标序列处造成DNA双链断裂,引发非同源末端连接修复机制,引入插入或缺失突变。观察测序峰图,证明两个靶向目标序列T1、T2均有剪切效率,且T1高于T2。建立了一种高效快速检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法

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