%0 Journal Article
%T 一种检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法
%A 张癸荣
%A 池振奋
%A 聂凌云
%A 高敬
%A 魏迪
%J -
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.012
%X 摘要 旨在建立一种简便检测线粒体DNA(mtDNA)核酸酶靶向剪切活性的方法。利用转基因技术，将一段含有两个靶向目标序列(T1、T2)的线粒体DNA序列随机整合到宿主基因组中，通过实时荧光定量PCR筛选单拷贝或低拷贝的单克隆转基因细胞株。将含有T1、T2的CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9质粒分别瞬时转染到所选细胞株中，靶向剪切核基因组，在靶向目标序列处造成DNA双链断裂，引发非同源末端连接修复机制，引入插入或缺失突变。观察测序峰图，证明两个靶向目标序列T1、T2均有剪切效率，且T1高于T2。建立了一种高效快速检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法
%K 线粒体核酸酶
%K 转基因细胞株
%K 靶向修饰
%K CRISPR/Cas9
%K 实时荧光定量PCR
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract10914.shtml