高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TA-12株ORF6基因的克隆、鉴定及真核表达

摘要 旨在获得 HP-PRRSV TA-12(GenBank登录号：HQ416720)分离株ORF6蛋白的高效表达，将HP-PRRSV TA-12分离株的ORF6基因克隆到载体PfastBac HTB，并经转座进入E. coli含有杆状病毒质粒Bacmid的DH10BacTM细胞株，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定出阳性重组杆粒，再将提取的重组杆粒Bacmid-ORF6转染昆虫细胞sf9，使其表达ORF6蛋白。经Western blot鉴定，在感染重组杆状病毒后第4天ORF6蛋白表达量最大，达到0.05 μg/μL。表达的ORF6蛋白主要存在于细胞质中