重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定

摘要 旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant human β nerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增hNGF β亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 kD左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×106 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性