薄荷GPPS基因原核表达及RNA干扰载体构建

摘要 利用薄荷挥发油合成途径关键酶之一的薄荷牻牛儿基焦磷酸合酶（GPPS）基因特异引物，扩增得到GPPS基因开放式阅读框（1131bp），并将其插入到原核表达载体pET-28a中，经酶切测序验证的重组质粒pET-28a-GPPS转入Rosetta（DE3），利用IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示，终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导后6h，SDS-PAGE显示薄荷GPPS基因在Rosetta（DE3）中获得高效表达。目前利用RNA干扰技术研究基因功能的方法已日趋成熟，以GPPS大亚基基因为靶目标，成功构建了薄荷GPPS大亚基基因的pBI121-RNAi-GPPS干扰载体