单克隆抗体制备的亲和填料在血浆高丰度蛋白分离中的应用研究

分离去除高丰度蛋白成为血浆蛋白质组研究的关键问题之一。我们从已建株的17株抗人血浆白蛋白单克隆抗体库中选出一株合适抗体。该抗体用Protein G Sepharose 4B吸附，然后用交联剂DMP（Dimethyl pimelinediimidate chloride）使之与Protein G 蛋白共价交联。实验结果显示600μL（结合1mg抗体）胶能分离10μL血浆中的白蛋白和球蛋白。填料进行重复使用10次后吸附能力变化无显著改变。对填料的吸附蛋白进行MALDI-TOF/TOF 鉴定主要为白蛋白和球蛋白，及其碎片，但发现吸附的蛋白有转铁蛋白，纤维蛋白原，抗胰蛋白酶，前脂蛋白，Vitamin D 结合蛋白，Keratin 10和 CD5 antigen like蛋白。实验结果表明该方法能在固定目的抗体同时最大量地保持抗体活性，该方法有望在蛋白质组学研究的高丰度蛋白分离中得到广泛应用