氧化葡萄糖酸杆菌中5-葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

摘要 根据NCBI上的报道的基因序列设计引物，以氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacteroxydans）H24的基因组为模板，获得5-葡萄糖酸脱氢酶（Ga5DH）基因，将其与表达载体pET-28a连接，构建重组质粒pET-28a-Ga5DH，并转化大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE检测结果显示，表达蛋白的分子大小为26.5kD，纯化后酶活达7.83U/mg。酶学性质分析表明，该酶的最适反应温度为40℃，最适pH为11。在pH9-11的缓冲中保温8h，酶活力仍有80%以上的残余。该酶对多种有机溶剂具有良好的耐受性