水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定

摘要 旨在确定水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae，Xoo）c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变，表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析，进行了Clpxoo 及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化；通过等温滴定量热法（ITC），检测了Clpxoo 及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法，在优化的诱导表达和纯化条件下，成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明，Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点