微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达

制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株，从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin，MI)，其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接，在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中，抗生素筛选得到转基因花生苗，之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示，试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术，并且得到了转基因花生苗；分子生物学技术鉴定结果显示，微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中，且在花生叶片中表达，其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法，为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础