含扩增内对照的霍乱毒素基因ctx和不耐热肠毒素基因elt三重real-time PCR检测体系的建立

目的 建立一个含扩增内对照（IAC）的三重TaqMan real-time PCR体系，以检测霍乱毒素基因ctxA 和肠产毒性大肠埃希菌的不耐热肠毒素基因elt。方法 针对ctxA、elt 和IAC设计引物和探针，进行灵敏性和特异性分析，评价三重反应之间的互相影响。结果 该检测体系灵敏度为ctxA 每个反应94 拷贝，elt 每个反应79 拷贝，扩增效率分别为94.7%与98.1%。ctxA 与elt 拷贝数比例为1 ∶ 1～1 ∶ 10 时，二者均能良好扩增;elt 或ctxA 的量是IAC的100 倍以上时，IAC扩增受到抑制。结论 该检测体系具有良好的灵敏性和特异性，可以用于腹泻粪便中感染病原菌的检测，其中内对照检测可以提示粪便样本中是否存在PCR抑制因子