双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆

为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆，利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白，膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinothricin acetyltransferase，PAT）单克隆抗体和多克隆抗体，建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法，对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示，最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125 μg/mL，包被酶标板，37 ℃孵育1 h后4 ℃静置过夜，检测样品37 ℃孵育1.5 h，检测抗体质量浓度6.25 μg/mL，37 ℃孵育1.5 h；PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/mL，大豆蛋白体系中为8 ng/mL；重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件，对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测，成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达