嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析

分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异，以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板，构建分选酶A（sortase A，SrtA）重组表达载体pET28a-SrtAΔN48，转入大肠杆菌感受态细胞Transetta（DE3）内表达，使用Dabcyl-QALPTTGEE（Edans）探究其酶活特性。结果发现：嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA（Lap-SrtAΔN48）分子质量为20kDa左右；Mg2＋、Zn2＋、Mn2＋可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力；Ca2＋不会影响SrtAΔN48的活性，明显区别于致病菌；且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性。进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8条中心β桶状结构互相折叠而成，属于经典的分选酶结构，Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205