单增李斯特菌prfA基因缺失菌株的构建及其 生物学特性鉴定

单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）是一种风险较高的食源性致病菌，其绝大多数毒 力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA（positive regulatory factor A）蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方 法敲除Lm野生菌株EGDe的prfA基因，并通过测定生长曲线、毒力基因表达和侵袭Caco-2细胞能力等探讨单缺失菌 株EGDe-ΔprfA生物学特性。通过测定生长曲线显示prfA敲除株和野生型EGDe二者生长状态无差异；运用实时定量 荧光聚合酶链式反应检测EGDe-ΔprfA的主要毒力基因表达，结果显示plcA、plcB毒力基因的表达量分别上升至原来 的2.5 倍和2 倍，inlA、inlB、inlC、actA、vip等均呈下降趋势，prfA基因表达量趋向于零；侵袭Caco-2细胞结果显示 EGDe-ΔprfA侵袭数为野生株的1/5。该基因缺失菌株的构建及生物学特性研究对食源性致病菌EGDe致病机理研究具 有重要意义并且提供了重要材料