草鱼肝胰脏碱性磷酸酶的分离纯化及性质的研究

为获得草鱼肝胰脏的碱性磷酸酶，并阐明其性质，利用Tris-HCl（pH 7．5）缓冲液抽提、正丁醇脱脂、硫酸铵分级沉淀分离和葡聚糖凝胶（Sephadex G-150）等步骤对草鱼肝胰脏碱性磷酸酶进行分离纯化，测定碱性磷酸酶的动力学性质，研究金属离子对碱性磷酸酶活力的影响。试验结果表明，得到提取倍数为7．3倍、比活力为949．8 U/mg的碱性磷酸酶，酶液经SDS-PAGE呈一条带，其亚基的分子量约54 ku。动力学测定结果显示，该酶催化对硝基磷酸苯二钠水解反应的最适pH为10．33，最适温度为38℃，米氏常数为9．03 mmol/L ，最大反应速度为1．5μmol/（L · min）。Li＋、Na＋、K＋对碱性磷酸酶活力影响不大；Ba2＋、Ca2＋、M g2＋、M n2＋能激活碱性磷酸酶活力；EDT A、Cu2＋和Zn2＋抑制碱性磷酸酶活力。研究结果可为碱性磷酸酶在鱼类脂质代谢中的作用提供参考和依据