Wnt5a通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路调控人卵巢癌SKOV3/VCR细胞对长春新碱的敏感性

本研究旨在探究Wnt5a对人卵巢癌SKOV3细胞长春新碱(vincristine, VCR)耐药性的影响，并探讨其分子机制。采用浓度梯度递增法构建耐药株SKOV3/VCR细胞，将人WNT5A基因的干扰质粒转染SKOV3/VCR细胞并筛选出稳定干扰Wnt5a的细胞株，用RT-PCR检测Wnt5a的mRNA表达水平，用CCK-8法检测细胞活力，用流式细胞术检测细胞凋亡，用Western blot法检测Wnt5a、MDR1、Survivin、β-catenin、Akt、p-Akt(S473)、GSK3β和p-GSK3β(Ser9)的蛋白表达水平。结果显示，SKOV3/VCR细胞中Wnt5a、MDR1、β-catenin和Survivin蛋白的表达水平、Akt和GSK3β蛋白的磷酸化水平以及Wnt5a mRNA表达水平均显著高于其亲代SKOV3细胞；WNT5A基因沉默使VCR抑制SKOV3/VCR细胞活力的IC50从38.412降至9.283 mg/L，提高SKOV3/VCR细胞凋亡率并协同增强VCR诱导的细胞凋亡(P < 0.05)，下调MDR1、β-catenin和Survivin蛋白的表达水平(P < 0.05)，抑制Akt和GSK3β蛋白磷酸化(P < 0.05)；此外，PI3K抑制剂LY294002也可下调SKOV3/VCR细胞中MDR1、β-catenin和Survivin蛋白表达水平，并降低Akt和GSK3β蛋白磷酸化水平(P < 0.05)。以上结果提示，沉默WNT5A基因可在体外逆转人卵巢癌耐药株SKOV3/VCR细胞耐药性，作用机制可能与其抑制PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路，继而下调MDR1和Survivin蛋白表达有关