CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖的条件探讨

目的 探索CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳条件。方法 采用交叉设计或两因素完全随机设计探索分裂素刀豆蛋白（ConA）或脂多糖（LPS）刺激的脾细胞增殖实验的细胞制备方法、细胞浓度、分裂素浓度、刺激时间、培养基中胎牛血清（FBS）浓度、是否预培养等条件。结果 制备方法中以轻压制备的脾细胞增殖率高于轻磨；脾细胞浓度以5×106/mL为最佳；ConA浓度为2、5、10 μg/mL，LPS浓度为10、20、50 μg/mL细胞增殖率未见明显差异；刺激时间在48和72 h间脾细胞增殖率未见明显差异；用含10%、15%和20% FBS的培养基培养的脾细胞增殖率未见明显差异；制备的脾细胞当天刺激比第二天刺激增殖率更高。结论 ConA和LPS刺激的Balb/C小鼠脾细胞增殖实验的最佳条件为，轻压制备脾细胞，脾细胞浓度为5×106/mL，制备当天直接种板，ConA的刺激浓度为2~10 μg/mL，LPS的刺激浓度为10~50 μg/mL