巴什拜羊BPI基因的克隆与真核表达

从巴什拜羊外周血多形核粒细胞(PMN)中提取总RNA，经RT-PCR扩增出巴什拜羊BPI基因片段，将其克隆至pPIC9K载体中，构建真核表达质粒pPIC9K-BPI，经PCR、酶切及测序鉴定正确后，电转化至毕赤酵母GS115中并用甲醇诱导表达，SDS-PAGE鉴定重组BPI蛋白的表达，通过微量肉汤稀释法检测重组BPI蛋白的抑菌活性。结果表明：RT-PCR扩增获得597 bp巴什拜羊BPI基因；经PCR、酶切及测序鉴定证实成功构建BPI基因的真核表达载体，SDS-PAGE检测结果表明，重组BPI蛋白成功表达，通过抑菌试验表明表达的重组BPI蛋白具有明显抑菌活性