额外的错配碱基提高T4 DNA连接酶等位特异性连接

连接是一种主要的DNA处理过程。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性，T4 DNA连接酶被广泛应用于生物分子工程，特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本文评估了在T4 DNA连接酶介导的连接反应中，引入额外的错配碱基对所产生的影响。设计了超过150组DNA/DNA或DNA/RNA带有的额外错配碱基对的组合。结果发现，引入额外的错配碱基对后，T4 DNA 连接酶在DNA/DNA连接中特异性可提高60倍以上，而在DNA/RNA连接中特异性只能提高2倍。在等位特异性连接中，有的错配碱基对可使T4 DNA连接酶的特异性提高600多倍