PMA-实时荧光PCR快速检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌
Rapid detection of viable Staphylococcus aureus in vegetables and fruits using PMA-real time PCR

目的 将叠氮溴化丙锭（PMA）与实时荧光定量PCR（real-time PCR）技术相结合，快速检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌。方法 通过对影响PMA作用的关键因素，包括PMA浓度、光照时间以及活、死菌比例混合等进行试验，确定PMA的作用条件。以金黄色葡萄球菌nuc基因为靶基因，建立PMA-实时荧光定量PCR方法，并构建金黄色葡萄球菌重组质粒标准品，用于检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌。结果 在PMA 30 μg/ml浓度下，曝光5 min，可实现PMA筛选金黄色葡萄球菌活菌的作用。由构建的质粒标准品模板建立标准曲线表现出良好线性关系，相关系数r = 0.9995，所建立的方法灵敏度可达到14 copies /μl，且特异性良好。经2 h增菌后用PMA进行筛选，再用荧光定量PCR检测，可实现快速对蔬果样品中活的金黄色葡萄球菌的检测。结论 用PMA-实时荧光定量PCR方法可快速检测蔬果中活的金黄色葡萄球菌，可为食品安全风险监测提供可靠数据。