瞬时感受器电位通道 vanilloid 4 在机械牵张人脑微血管内皮细胞中对内皮型一氧化氮合酶的作用
Role of TRPV4 channels in regulation of eNOS expression in brain microvascular endothelial cells under the condition of mechanical stretch

目的：筛选人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells，HBMEC)中瞬时感受器电位 (transient receptor potential，TRP)通道亚型，检测该通道亚型在机械牵张刺激中对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)蛋白表达的影响及探讨相关机制。方法：荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)、Western印迹及细胞免疫 荧光筛选HBMEC上TRP通道亚型。根据筛选的TRP通道亚型将细胞分组，应用多功能小型生物撞击机给予机械牵张 刺激；流式细胞仪检测细胞牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化；Western印迹检测eNOS蛋白表达情况。结果：qRT-PCR 结果表明：TRPV4及TRPC1的mRNA相对表达量较多；细胞免疫荧光及Western印迹显示TRPV4通道蛋白表达；流式细 胞仪检测结果显示，特异性TRPV4通道抑制组较单纯牵张组Ca2+相对浓度低(P<0.001)，较未牵张组(P=0.072)、非特异 性TRP通道抑制组(P=0.308)无明显差异。Western印迹检测结果显示：TRPV4通道抑制组和内皮型一氧化氮合酶抑制 组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P<0.05)，较未牵张组无明显差异(P>0.05)。结论：TRPV4在HBMEC上有 表达，机械牵张将其激活后，可以引起eNOS蛋白表达增多，其机制可能与胞外Ca2+的内流有关