翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性
Expression and purification of FOXO1 DNA binding domain and its DNA properties

目的：探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain，FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性。方法：采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达，通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化，并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性。结果：优化后的FOXO1基因在21 ℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达，通过两步纯化即可获得95%以上纯度的FOXO1-DBD蛋白，纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性。结论：建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法，验证了FOXO1蛋白在识别DNA上的复杂性