Annexin A11 G38R及D40G突变通过降低蛋白稳定性引起肌萎缩侧索硬化症的发生
Mutations of G38R and D40G cause amyotrophic lateral sclerosis by reducing Annexin A11 protein stability

目的：探讨Annexin A11(ANXA11) G38R及D40G突变引起肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis， ALS)的发病机制。方法：构建编码ANXA11 G38R，ANXA11 D40G突变蛋白及ANXA11野生型蛋白真核表达载体pANXA11- G38R-Flag，pANXA11-D40G-Flag和pANXA11-Flag；将其转染至HEK293细胞后，用放线菌酮分别处理0，2，4，8 h；收 集蛋白采用Western印迹检测3种蛋白的含量变化情况，比较目标蛋白的半衰期；构建稳定表达ANXA11 G38R，ANXA11 D40G突变蛋白及ANXA11野生型蛋白的NSC-34细胞系，用Western印迹检测上述蛋白在NP-40裂解液中的溶解情况。结 果：ANXA11 G38R，ANXA11 D40G突变蛋白的半衰期较野生型蛋白缩短(P<0.05)，ANXA11 G38R蛋白和ANXA11 D40G 蛋白半衰期无明显差异(P>0.05)；ANXA11 G38R，ANXA11 D40G突变蛋白与ANXA11野生型蛋白在NP-40裂解液中均 未发现不可溶成分。结论：G38R和D40G突变降低了ANXA11蛋白的稳定性；G38R和D40G突变不影响ANXA11蛋白在 NP-40裂解液中的可溶性