基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体

摘要 采用时间分辨荧光技术，检测了不同形态蛋白聚集体的荧光染料硫磺素T（ThT）荧光寿命.利用蛋清溶菌酶体外制备了蛋白聚集体；采用透射电子显微镜（TEM）及ThT稳态荧光检测了结合蛋白纤维生长的动力学曲线，确定其形成寡聚体及纤维样聚集体的特征和时间.通过时间相关单光子计数（TCSPC）技术测定了蛋清溶菌酶单体、寡聚体和淀粉样纤维的ThT荧光寿命曲线，并拟合、计算其荧光寿命.根据圆二色谱（CD）分析结果推测聚集体的结构不同导致其与ThT的结合状态不同，从而影响ThT荧光寿命.结果表明，通过测定ThT荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体和纤维样聚集体，并监测蛋白寡聚体的形成，为后续病理蛋白聚集过程中形成寡聚体物质的监测提供了研究基础