应用实时荧光pcr技术检测构巢曲霉的初步研究

目的根据构巢曲霉（aspergillusnidulans）3-磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，gapdh）基因特异位点设计并合成taqman探针及引物，建立构巢曲霉实时荧光pcr检测方法。方法应用lasergene7.1软件对构巢曲霉与13种常见曲霉主要包括黑曲霉（a.niger）、烟曲霉（a.fumigatus）、杂色曲霉（a.versicolor）、土曲霉（a.terrus）、黄曲霉（a.flavus）、温特曲霉（a.wentii）、寄生曲霉（a.parasiticus）、泡盛曲霉（a.awamori）、米曲霉（a.oryzae）、棒曲霉（a.cavatus）、赤曲霉（a.ruber）、亮白曲霉（a.ochraceus）及赭曲霉（a.ochraceus）gapdh基因序列比对分析，在特异位点设计引物和探针，建立构巢曲霉实时荧光pcr检测方法，并对该方法进行特异性及敏感性分析。结果用曲霉属22种41株不同曲霉及其他属的12株病原真菌验证实验表明，所建立的荧光pcr方法特异性强；检测灵敏度可达4.03×10－12μg/ml的模板dna。结论应用实时荧光pcr技术能够有效检测构巢曲霉，该方法具有特异、灵敏、快速等特点，可在实际工作中应用。