基于sybrgreeni的双链dna定量方法

摘要基于sybrgreeni荧光染料与双链dna（dsdna）结合产生荧光的原理，建立一种高精度、高通量的双链dna定量方法。将梯度稀释后的基因组dna及已知浓度的?dna与等体积的sybrgreeni（4×）充分混合后，利用荧光定量pcr仪采集荧光信号，以rox（1×）作为校正染料进行定量分析；同时利用紫外分光光度计对样品进行平行测定，比较该方法与紫外分光光度法的检测限与准确度。紫外分光光度法的检测限为2ng/?l，而sybrgreeni荧光定量法的检测限可达到0.015ng/?l，并且在0.015~2ng/?l范围内，sybrgreeni荧光强度与?dna浓度呈线性关系（r2=0.9999），比紫外分光光度法灵敏100倍以上，并可准确定量低纯度的dna样品。此方法具有重复性好、高通量的特点，仅需少量的生物样本即可满足定量要求，为分子生物学研究及临床检验等多个领域提供了一种可靠的dsdna定量方法。