脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及表达产物性质的研究

从环境中筛选到了脂肪酶高产菌株金黄色葡萄球菌jh，依据ncbi上发表的原核微生物脂肪酶基因序列的多序列比对，发现它具有很强的序列保守性。利用pcr从金黄色葡萄球菌jh基因组中扩增得到了脂肪酶基因，利用基因重组技术将其整合到质粒pc194中，并导入到枯草芽孢杆菌中进行表达。应用选择抗药性筛选重组子，利用硫酸铵沉淀法和离子交换层析分离纯化重组脂肪酶，并用ds-page进行纯度鉴定，确定其相对分子量约为32000da。通过对其酶学特性的研究发现，重组脂肪酶在反应温度为41℃，ph为8.0时具有最大活性，其km和vm各自为0.34mm和308μmol？mg-1min-1，ca2+、k+、mg2+能激活这种酶的活性鳩e2+、cu2+、co2+则抑制它的活性。