猪源戊型肝炎病毒基因iv型orf3编码蛋白的表达及鉴定

通过pcr从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增orf3全基因，将扩增产物插入到pmd18-t载体中，亚克隆至原核表达载体pet28a（+），构建pet28a-orf3表达载体，转入e.colibl21(de3)，iptg诱导表达。ni-nta层析柱纯化表达蛋白，用sds-page、免疫印迹、elisa等方法分析鉴定表达产物。结果成功扩增到345bp的目的基因；构建了重组表达载体pet28a-orf3；转化宿主菌e.colibl21(de3)后表达产物的相对分子质量在6.50~16.5kda之间，与预期表达的目的蛋白相对分子质量相符；表达的目的蛋白能与阳性猪源和人源血清发生特异性反应,证实其具有较好的反应原性。