利用t载体克隆快速构建布鲁氏菌缺失突变株

目的：建立一种基于t载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法，提高布鲁氏菌突变株构建的效率；方法：采用融合pcr的方法，将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来，构建突变盒，然后将突变盒直接与t载体连接，构建突变载体，将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆，进而获得布鲁氏菌的缺失突变株。结果：结合融合pcr和t载体快速克隆，能够在48h之内构建好突变载体，与传统的酶切连接相比，效率高、周期短。结论：基于t载体快速克隆是一种非常高效的构建突变株的方法，为布鲁氏菌突变株的构建提供了一种新方法。