烟草富含甘氨酸rna结合蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要:目的克隆烟草富含甘氨酸rna结合蛋白基因（glycine-richrna-bindingprotein,gr-rbps）并进行原核表达,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理打下基础。方法从总rna中反转录扩增并克隆烟草富含甘氨酸rna结合蛋白ntrgp-1a和ntrgp-3全长cdna，将cdna序列克隆到表达载体pgex4t-1上，构建了重组表达质粒pgex4t-1/ntrgp-1a、pgex4t-1/ntrgp-3，转化大肠杆菌rosetta，iptg诱导表达，gstrap4b亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,sds-page显示其相对分子质量与预计大小一致，蛋白纯度占总蛋白的95％以上。结论本研究成功克隆和表达了烟草富含甘氨酸rna结合蛋白ntrgp-1a和ntrgp-3基因序列,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理等进一步的研究奠定了基础。