gluconobacteroxydans木糖醇脱氢酶基因的克隆表达及木糖醇的转化分析

从氧化葡萄糖酸杆菌(gluconobacteroxydans)的基因组dna上扩增出木糖醇脱氢酶基因xdh，构建了诱导型表达载体pse-xdh，导入e.colijm109后获得了高效表达木糖醇脱氢酶基因的重组菌jm109/pse-xdh。通过histraphp亲和层析和sephacryls300分子筛两步纯化从细胞中得到纯酶，并对酶学性质进行研究。xdh最适还原反应的ph值为5.0，最适还原反应的温度为35℃；最适氧化反应的ph值为11.0，最适氧化反应的温度为30℃。重组菌中的xdh依赖nadh，对nadh的米氏常数km=57.8mmol/l，最大反应速率vmax=1209.1mmol/(ml·min)。重组菌的xdh酶活力为13.9u/mg。利用重组菌和原始菌混合静止细胞转化d木酮糖，16h28.0g/ld木酮糖生成16.7g/l木糖醇，而原始菌单独转化只生成8.3g/l木糖醇。